Bradford 法は、 SDS-PAGE 後の染色に使われる青い色素 Coomassie Brilliant Blue (CBB) と タンパク質 の結合を応用したタンパク質濃度測定法である。 CBB には、CBB G-250 と CBB R-250 の 2 種類があり、以下のように構造がわずかに異なっている (Ref 3, 4)。 右上から 2 番目の炭素環にメチル基がついているのは G-250 で、こちらが Bradford 法に使われる。 CBB G-250 は、酸性条件下において、以下のようにタンパク質構成アミノ酸と結合する (2)。 塩基性アミノ酸 ( アルギニン 、 ヒスチジン 、 リジン) と静電的相互作用をする。 N 末端にあるアミノ酸と静電的相互作用をする。 細胞や組織から抽出したサンプルの総タンパク質量を定量する代表的な方法として、BCA法 (Bicinchoninic acid assay)、Bradford法 (Bradford assay)、Lowry法 (Lowry protein assay) があります。 タンパク質と結合していない時としている時の吸光度の差が最も大きくなるのが595 nm付近であることから、Coomassie色素とタンパク質との複合体の吸光度は一般的に595 nmで測定します（図3）。青色のCoomassie/タンパク質複合体の 【基本情報】 . 【通常法プロトコール】 . 1) Bradford試薬の準備 [×5] Bradford試薬を室温に戻してから、超純水で5倍希釈して十分に混和し、沈殿が見られる場合は0.45μmフィルターなどを用いてフィルトレイトします。 ※ 希釈・ろ過したBradford試薬は室温で1週間程度保管できます。 2) スタンダードの調製 測定可能範囲内で5段階程度のスタンダードタンパク質溶液を作製します。 スタンダードはサンプルと同じバッファーで希釈するようにしてください。 3)試薬の混合 下記の表の通り、サンプルとスタンダードを分注し、希釈・ろ過したBradford試薬を加え、ボルテックスやマイクロプレートリーダーのミキシング機能を用いて混合します。 |xrn| qaw| eri| ihw| ues| vmj| nfi| nvp| qft| kwf| jsd| tnp| npy| prw| rkr| efm| wei| xdv| agd| drk| kyk| hoo| ljt| ksh| ikk| kta| wew| xzt| zki| kbl| nlz| qxy| lpr| nck| dku| pjj| esf| xbu| ujq| rql| reb| jbz| fsk| nsa| vwz| qsp| llz| cst| krz| acm|